Preguntas y respuestas habituales en la preparación de la solución de tiocianato de guanidina

El tiocianato de guanidina es un fuerte desnaturalizante proteico. No solo puede disolver rápidamente proteínas, conducir a la fragmentación de la estructura celular y separar rápidamente las proteínas nucleares de los ácidos nucleicos debido a la destrucción de la estructura secundaria, sino que también tiene un fuerte efecto de desnaturalización sobre las RNasas. Por lo tanto, el tiocianato de guanidina se puede usar como desnaturalizante para lisar células, separar el ARN de la proteína y liberar ARN en solución. Sin embargo, a menudo se encuentran algunos problemas en la preparación y uso de la solución de tiocianato de guanidina. Este documento responderá a estos problemas uno por uno.

¿Es necesario utilizar y preparar la solución de tiocianato de guanidina ahora?

La concentración final de tiocianato de guanidina fue de 4 m como ejemplo: citrato de sodio de 42 mm, n-lauril sarcosina al 0,83% (dodecilo sódico, n-metilglicina), β-0,2 mm. Preparación de tampón CSB a partir de mercaptoetanol; Se mezclan 25 g de tiocianato de guanidina y 33 ml de solución tampón CSB hasta que se disuelven por completo. La solución desnaturalizada se puede preparar calentando y disolviendo a 65ºC.℃ y almacenado a 4℃ en espera.

Por lo tanto, la solución de tiocianato de guanidina no tiene que usarse ni prepararse ahora, y existen soluciones de diferentes concentraciones en el mercado en la actualidad, pero el tiempo de almacenamiento no es fácil por ser demasiado largo, de lo contrario habrá precipitación, que debe ser revisado cuidadosamente antes de su uso; Además, si hay demasiada preparación de una sola vez, se recomienda volver a empaquetar.

¿La solución de tiocianato de guanidina necesita esterilización después de su preparación?

No es necesario esterilizar la solución de tiocianato de guanidina, que no es muy estable, y generalmente se usa agua DEPC al 0,1% con solución de pirólisis, y el agua ha sido esterilizada. Además, todos los reactivos para extraer ARN deben prepararse con agua DEPC, y el reactivo debe abrirse nuevamente y usarse exclusivamente para ARN.

Aunque el lisado preparado no necesita esterilizarse, debe tenerse en cuenta que los productos plásticos utilizados en el experimento se han marcado como libres de RNasa. Si no se han abierto para su uso, se pueden usar directamente. Otros deben ser tratados: agregue DEPC en agua bidestilada para que su concentración final sea 0.1%, remoje los productos plásticos en ella, ventile la cocina durante la noche y luego séllelos con papel de aluminio, Esterilización a alta temperatura y alta presión durante al menos 30 minutos, seco y en espera.